KeyTec® TR-FRET Human VHL binding kit

KeyTec® TR-FRET 人源 von Hippel−Lindau 蛋白结合检测试剂盒可测定针对野生型人源 von Hippel−Lindau (VHL) 蛋白的配体或抑制剂结合情况。本试剂盒是运用 KeyTec® TR-FRET 技术开发的竞争型免疫分析方法，具有简单快速、特异性高、灵敏度高、重复性好等特点。试剂盒中使用了带标签 1 的 VHL/Elongin C/Elongin B 蛋白复合体（Tag1-VHL/Elongin C/Elongin B protein complex, 后续使用缩写 Tag1-VCB complex 表示）和偶联了 KeyTec® TR-FRET LA*1的 VHL ligand（CAS# 1948273-02-6，可募集 VHL 蛋白，并可用于合成 PROTAC，如 MZ 1）。本试剂盒可用于 VHL 抑制剂或配体的高通量筛选与亲和力测定。 本方法的基本原理如下图所示，Solar Eu*2偶联的抗标签 1（Tag1）抗体可特异性识别Tag1-VCB complex，LA*1偶联的 VHL ligand 可与 VCB complex 结合，从而使 Solar Eu 和LA 相互靠近，在外部光源的激发下，供体与受体之间发生能量共振转移；检测特定波长（665nm）的信号强度即可测定 VHL ligand 与 VCB complex 之间来的结合程度。当体系中无抑制剂或配体参与竞争时，信号最高；随着加入抑制剂或配体的浓度升高，信号逐渐降低；TR-FRET信号强度与抑制剂或配体的亲和力成反比。